الخبراء
دراسة تجريبية
تقييم التغيرات العضلية بعد التطبيق العضلي للاندوبيل
درس المؤلفون تغير المشية ورد الفعل النسيجي للعضلة التي حصلت على حقنة الاندوبيل.
اخترنا تطبيق الاندوبيل في عضلة ما قبل الظنبوب من الفئران ودراسة التغيرات النسيجية.
تم اختيار عضلة ما قبل الظنبوب من الجرذان بسبب تشابه الوزن مع العضلات الخافضة لزاوية الفم عند الانسان.
الهدف: دراسة الظاهرة البيولوجية التي يسببها حقن الاندوبيل في العضلة قبل الظنبوب من الجرذ الوستر وتقييم التغيرات في مشيته والتغيرات النسيجية المرضية في العضلات المطبقة.
1 المؤلفون
الدكتور الان تينينبوم
السيد مورو تيزياني
2 توماس يونق جون كيم
3 رومولو موني
01
فريق الدراسة
المختبرين : ر.موني. السيد كيم. ا.تينينباوم. السيد تيزياني
الرقم = 29 فأر تجارب
الوزن : 421g
أصل الحيوانات : مركز البيوتريوم بالحرم الجامعي ريبيرايو بريتو لجامعة ساو باولو
الصيانة : مختبر علم الامراض قسم علم الامراض بجامعة الطب لريبيرايو بريتو
رعاية الحيوان : صندوق البولي بروبلين
أكل الحيوانات : مأكولات مخبرية بسيطة مع الماء
ظروف الاضاءة : اضاءة طبيعية/ دورات الظلام تحت المراقبة في الضروف البسيطة
02
تمويت الحيوانات و العينات النسجية
الفحص المجهري التقليدي (البسيط)
1-يتم تمويت الفئران في غرف غاز ثنائي اوكسيد الكربون
2-يتم شق الجلد بشفرة رقم 23
3-ايجاد عضلة أمام الظنوب و عزلها باستعمال مقص ميتزينباوم
تشريح الاوتار بمقص مايو
- تثبيت أجزاء العضلات على اقسام من بلوط الفلين
- التضمين باستخدام محلول فورمالديهايد 50%-ربت10% و 50% بارافين نقي للدراسة المجهرية الضوئية البسيطة
- تلطيخ الشريحات كعملية نسيجية روتينية
- المشراح المستعمل : Leika RM 2155
- تلوين أجزاء العضلات يتم عن طريق : الهيماتوكسيلين-الايوزين-ترايكروم ماسون-احمر بيكرو سيريوس
- تم الفحص النسيجي عن طريق المجهر التقليدي (البسيط) (Olympus BH-2)
- تمت الملاحضة تحت مصباح مستقطب
- تم التوثيق الفوتوغرافي بمجهر Leika DMR مرتبط بكامرا رقمية Leika CD300F و متناسقة مع الحاسوب
03
الاجهزة و المواد
الفئران/ 6 صناديق
- تم وضع الحيوانات في صناديق حيث انها رقمت من 1 الى 6 : تحتوي الصناديق من 1 الى 5 على 5 فئران اما الصندوق السادس على 4 فئران.
- كل الحيوانات تخضع الى تقييم للمشي من خلال الملاحضة لأثار اقدامها على ورق خاص و أقدامها الخلفية تخضع لنفس تقييم في محلول صابون.
- كان لذى الصندوق الاول مجموعة التحكم حيث تلقو تطبيق 0.1 مل من محلول ملحي (NaCl 0,9%) في عضلة مقدم الضنبوب اليمنى.
- فئران الصناديق من 2 الى 5 تلقو منتج الاندوبيل الرئيسي الاصلي في نفس العضلة كمجموعة تحكم.
- اما الصندوق الرابع المكون من 4 فئران تلقو 0,5 مل من منتج الاندوبيل الرئيسي الاصلي حيث حقن في الطبقة التحت جلدية.
- كل الحيوانات خضعوا الى تقييم المشي قبل و بعد حقنهم.
04
الطرق
كل الحيوانات يتم تمويتها بعد فترة 10 أيام/شهر/3أشهر/7اشهر
تقييم المشي
تم الاعتماد في تسجيل أثار أقدام الفئران على أشرطة من الورق 43×8,7 (سم) تم اختيار هذه المقاسات حيث انها تتناسب مع منصة مشي لها, التي بنيت حسب رسمة ميناشيلي؛ فريد؛ وايات (1982). تم سابقا غطس الاشرطة في محلول البروموفينول الازرق المستعمل.
من أجل تحضير الورق يتم تمييع البروموفينول الازرق اللامائي في 1% من الاسيتون المطلق حيث يتم الحصول على لون برتقالي.
تغطس الاوراق في المحلول و يتم تجفيفها في الشمس, بعدها يتم تقطيع الاوراق الى شرائط و تخزن في عبوات بلاستيكية تفاديا تعرضها لرطوبة التي يمكن ان تؤثر عليها و تغير من لونها الى الازرق.
قامت الحيوانات بالمشي على المنصة المغطاة بالشرائط الذي قمنا بتحضيرها سابقا, حيث تغيرت الوان الاثار فور مشيها عليها من الاصفر الى الازرق. تبقى الاثار على الاشرطة الورقية حيث تترك لتجف ليتم أخذ التدابير اللازمة من أجل القيام بالعمليات الحسابية الخاصة بالمؤشر الوظيفي الوركي.
بعدها تحلل النتائج عبر البرانمج الحاسوبي (software) الذي طور من طرف SELLI سنة 1998, لنتحصل على على مؤشر الوضيفي الوركي, حيث تم طرح هذا الاقتراح من طرف باين؛ ماكينون؛ هنتر سنة 1989 الذي يأخذ بعين الاعتبار أثار الاصابع, اجمالي انتشار اصبع القدم من الاول الى الخامس, و الاصابع الوسطية الذي هما الثاني و الرابع. تم الحصول على اثار اقدام هذه الحيوانات بعد حقنهم بالاندوبيل كمراقبة و فورا بعد الحقنة و تارة اخرة عبر مجالات زمنية محددة, حيث يتم بعدها تمويت الحيوانات لاستخلاص عضلة الضنبوب الامامي من اجل الدراسة النسجية.
تم مسح اثار الاقدام بالماسح الضوئي ليتم ادخالها عبر برنامج SELLI ليسمح بالتقاطها, التعرف و تحليل الصور و السماح بتطبيق طرق اخرى لتعرف بالمؤشر الوضيفي الوركي (DE MEDINACELI, FREED, WYATT ; 1982, DE MEDINACELI, DERENZO & WYATT ; 1989, CARLTON & HUNTER ; 1989), حيث عند ظهور الاثار على شاشة الحاسوب, تحلل معالمها و تقاس, حيث يتطلب وضع المؤشر لنقر بالتسلسل الصحيح المذكور سالفا, بعدها يقوم البرنامج بالحسابات و اضهار قيمة المؤشر, ليتم ايضا تخزين هذه المعلومات في الحاسوب.
اثار اقدام الفأر بعد حقن 0.5مل في عضلة قبل الضنبوب الصحيحة
مؤشر الوظيفي الوركي او الحسابات SFI و المقاسات
مخطط المقاسات لحساب المؤشر الوظيفي الوركي
E : تجريبي (تعمل بالقدم)
N : عادي ( القدم المعاكسة )
TS : الافتتاح الكلي لاصابع القدم ( من الاول الى الخامس)
IT : افتتاح الاصابع الوسطية ( الثاني و الرابع)
LP : طول الخطى
برنامج يستعمل لقياس المؤشر الوضيفي الوركي SFI
تحليل المشي
استنتاجات المشي
- NaCl 0.9%, 0.1 مل في عضلة امام الضنبوب لا تؤثر على المشي
- حقن 0.1 مل من الاندوبيل تحت الطبقة الجلدية لعضلة امام الضنبوب يؤثر على المشي فورا عند الحقن و تنخفض الاثار بعد مرور من 10 الى 30 يوم
- تنقص الاثار الذي تسببها حقنة الاندوبيل مع الوقت عندما تحقن بهذا التركيز
- الحقنة في الطبقة التحت جلدية ليس لديها اثر كبير كمثل ما تحقن في العضلة
- لما تحقن 0.5 مل من الاندوبيل في طبقة تحت الجلد (عضلة تحت الضنبوب) هناك تضهور تدريجي في المشي من المحتمل انه بسبب الانتشار البطئ لاندوبيل من الطبقة التحت جلدية الى العضلة.
